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本试剂盒提供全套试剂，适用于从各种动物组织样本中提取总蛋白。提取过程简单方便。试剂盒所配离心柱用来有效去除非蛋白质类杂质，并非采用离心柱吸附蛋白质。

本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解细胞膜组分，包括细胞质膜、核膜和各种细胞器膜。本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。

本试剂盒提取的蛋白样本含有高浓度的盐成分，不可直接用于2D电泳，如下游实验需要直接用于等电聚焦、双向电泳，请使用百奥莱博其他货号的试剂盒。也可以将最后样品除盐后再用于2D电泳，用蛋白脱盐柱脱盐处理。

本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。

• 使用方便，提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。
  
• 将蛋白提取的时间缩短至30分钟～1小时。
  
• 含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
  
• 紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
  
• 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
  
• 本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。
  
• 本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。

• 蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2～8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
  
• 蛋白酶抑制剂2～8℃时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
  
• 有效期为试剂盒未拆封前按要求条件保存的有效期，试剂拆封后请尽快使用完！

• 仪器准备：离心机、振荡器、匀浆机/匀浆器、涡旋混匀器、移液器、冰箱、冰盒
  
• 试剂准备：PBS缓冲液(pH7.4)、蛋白定量试剂盒
  
• 耗材准备：离心管、吸头、一次性手套

• 正式实验前请选取几个样本做预实验，以优化实验条件，取得最佳实验效果。
  
• 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。
  
• 禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。
  
• 样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。
  
• 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
  
• 实验后完成后所有样品及接触过的器皿应按照规定程序处理。

• 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
  
• 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
  
• 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
  
• 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。

• 提取液制备：每500μL蛋白提取液中加入2μL蛋白酶抑制剂混合物和2μL蛋白稳定剂，混匀后置冰上备用。
  
  • 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
    
  • 蛋白样品用于测定某些细胞内蛋白酶、磷酸酶活性等下游实验时，注意根据实际情况调整抑制剂混合物是否加入。
    
  • 以下步骤中使用的蛋白提取液为此步配制好的含蛋白酶抑制剂的提取液。
• 取50～100mg组织，用PBS洗干净。然后用手术剪刀剪碎，加入500μL蛋白提取液，用组织匀浆器/匀浆机匀浆至无明显肉眼可见固体。
  
  • 如果组织样品很细小，可以剪碎后直接加入提取液振荡15分钟，可以不用匀浆器。
    
  • 也可用液氮研磨的方法。
• 将组织匀浆吸入一预冷的干净离心管中，在4℃条件下振荡10～20分钟。
  
  • 用振荡器/摇床的较低转速，保持液体轻微晃动即可。
    
  • 没有振荡条件可以不振荡，稍微延长试剂的处理时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀。
• 套上液体收集管，将提取液吸入蛋白离心管内管中，在4℃，10000g条件下离心5分钟。
  
  • 离心前蛋白液会在重力作用下自然流穿离心柱，一定要先套上收集管再吸入蛋白液。
• 收集套管内液体即得到组织总蛋白。
  
• 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
  
  • 建议用BCA法进行蛋白定量。推荐使用BCA法蛋白定量试剂盒。
    
  • 蛋白样品－80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。

• 冻存组织样本参照上述组织样本步骤操作。
  
• 冻存样本不用PBS洗涤，直接加入蛋白提取液处理即可。

• 细胞裂解速度慢？
  为了充分保证提取得到的蛋白的活性，提取液采用独特的保护蛋白的配方，裂解能力温和，下游应用范围广。适当延长裂解的时间即可。
  
• 蛋白浓度低？
  处理部分组织样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
  
• 用什么方法定量蛋白？
  建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂A中含有干扰Bradford法的组分，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。
  
• 提取的蛋白具有活性吗？
  本试剂盒不含有离子型去垢剂组分，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。